在线客服

猪疫苗 禽疫苗 化药产品 牛羊产品 人力资源
在线客服

猪瘟ELISA抗体监测方法简述

来源:文|徐静 汪谦 王琳璐发布时间:2019-07-18 点击率:2317

猪瘟仍是对我国养猪业危害较大的、经济损失较高的疾病之一。我国采取疫苗接种预防控制猪瘟,评价疫苗的免疫效果在生产实践中尤其重要。猪瘟疫苗免疫效果监测手段有多种。比如IHA(间接血凝试验)、中和抗体检测方法、ELISA抗体检测方法等等。

IHA方法在我国尚未引入ELISA方法时应用较为广泛,采用猪瘟抗原致敏的红细胞,与猪瘟血清作用,猪瘟抗体与猪瘟抗原结合,导致红细胞聚集,呈现血凝。该方法由于受到致敏红细胞保存时间、致敏红细胞保存要求的苛刻条件而导致该方法稳定性差。在引入中和抗体和ELISA抗体检测方法后应用范围逐渐缩小。

中和抗体检测方法是OIE(国际兽医局)推荐的金标准。该方法采用固定猪瘟病毒含量,稀释血清,将稀释的血清与猪瘟病毒作用,然后再接种细胞(或接种猪),接种细胞,未中和掉的猪瘟病毒在细胞上增殖,通过荧光抗体染色法确定血清在某稀释度能完全中和一定量的猪瘟病毒,该稀释度则为血清的猪瘟病毒中和抗体效价;接种猪后,根据不同血清稀释度中和猪瘟病毒后的发病数量,计算血清中和抗体效价。中和抗体效价能真正反应疫苗接种后的免疫效果,但由于该方法技术上相当复杂,时间较长,不利于在生产时间中应用,仅作为实验室评价猪瘟疫苗时采用。

猪瘟病毒抗体ELISA(酶联免疫吸附试验)抗体检测方法由于检测所用时间短,同一厂家的试剂盒检测的结果相对稳定而受到养殖场和广大的监测诊断实验室青睐。猪瘟ELISA方法根据包被的抗体、所用的二抗以及支撑材料不同又分为:以各种纤维素膜为支撑材料胶体金(快速检测试纸条,该方法与ELISA方法原理类似,只是最终反应的不是酶与底物的反应显色,因此将此方法归类为ELISA方法)、dot-ELISA(支撑材料与胶体金类似,原理与普通ELISA相同);常说的ELISA方法以聚乙烯板为支撑材料的,该方法又可分为阻断ELISA和间接ELISA。由于ELISA在生产实践中广泛应用,本文就对此方法进行详细的阐述。

猪瘟抗体快速检测试纸条(胶体金法):将特异性的抗体以条带状固定在膜上,金标抗原吸附在结合垫上,当待检血清样品加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的金标抗原后相互反应,再移动至固定的抗猪IgG二抗的区域时,待检血清中抗体与金标抗原结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测线上,可通过肉眼观察到显色结果;对照线上有猪瘟抗原的单抗,金标抗原与对照线猪瘟单抗结合而被截留,通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。由于该方法检测单份样品成本较高,不能用于批量监测,因此猪瘟抗体快速检测试纸条仅用作猪瘟确诊。

Dot-ELISA:与常规的ELISA原理一样,只是支撑物为硝酸纤维膜,在此不详细赘述。

猪瘟阻断ELISA抗体检测方法(竞争ELISA):在聚乙烯板上包被猪瘟抗原(可能是E2蛋白、Erns蛋白或猪瘟全病毒),然后加入待检血清,待检血清中含有猪瘟抗体,则与抗原结合,抗体含量越高,将包被板上猪瘟抗原结合位点占用越多(相当于交通车位置固定,第1个站点上车的人越多,后面站点能坐到位置的人就越少),然后加入酶标记猪瘟抗体(可能是E2蛋白或Erns蛋白单抗或多抗),若待检血清中猪瘟抗体越少,加入酶标记猪瘟抗体就能越多结合在包被板上(即是说检测孔中酶越多),然后加入底物,酶导致底物发生化学反应,显示出颜色。用酶标仪读出OD值,根据试剂盒说明书判定阴阳性。

猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法(间接法):在聚乙烯板上包被猪瘟病毒抗原可能是E2蛋、蛋白、Erns蛋白或猪瘟全病毒),然后加入待检血清,待检血清中含有猪瘟抗体,则与抗原结合,抗体含量越高,与包被板上的抗原结合越多(相当于挂车,结合越多的抗体,抗体上就多出一个拖挂位置),然后加入酶标记抗猪IgG,与待检血清中的抗体位点结合(与拖挂位置结合),然后加入底物显色。用酶标仪读出OD值,根据试剂盒说明书判定阴阳性。

1 间接ELISA与阻断ELISA差异

方法

阻断(竞争)ELISA

间接ELISA

包被的成分

抗原(E2Erns、全病毒)

抗原(E2Erns、全病毒)

待检血样

抗体

抗体

酶标二抗

抗抗原的抗体(针对E2蛋白或Erns蛋白某个表位的单克隆抗体

抗抗体的抗体(针对猪IgG的抗体较常用)

特异性

与包被的抗原、所使用的酶标二抗关系极大

与所包被的抗原关系极大

敏感性

与包被的抗原、所使用的酶标二抗关系极大

与所包被的抗原以及间接ELISA本身具有级联放大

关于猪瘟ELISA抗体检测方法的敏感性:根据两种不同ELISA检测方法的原理,在包被同样的抗原的情况下,间接ELISA方法敏感性跟高。但不能说间接ELISA方法比阻断ELISA方法更敏感,因为敏感性除方法原理的本身外,还与实际包被的抗原以及所使用的酶标二抗有极大的关系。

关于ELISA抗体检测方法的特异性:根据两种不同ELISA检测方法的原理,在包被同样的抗原情况下,阻断ELISA方法更为特异。

比如阻断ELISA中,抗原包被ErnsE2蛋白,酶标二抗为抗ErnsE2蛋白某个表位的单克隆抗体,这样的阻断ELISA方法特异性更高,敏感性相对较低,比如IDEXX、广东悦洋公司猪瘟ELISA抗体检测试剂盒。假如抗原包被猪瘟全病毒,酶标二抗抗猪瘟病毒的多克隆抗体,那么该阻断ELISA方法的特异性会相对较低,敏感性则受到的影响不大。假如抗原包被猪瘟全病毒,酶标二抗抗猪瘟病毒的某个蛋白某个表位的单克隆抗体,那么该阻断ELISA方法的特异性会相对较低,敏感性则会提高,比如LSI、韩国安捷、韩国金诺猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒。

在间接ELISA中,目前以中国兽医药品监察所研发的猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒为代表。该试剂盒包被的是E2蛋白,酶标二抗为抗猪IgG。其敏感性比IDEXX公司猪瘟ELISA抗体试剂略高。

2 不同厂家猪瘟ELISA抗体检测试剂盒比较表

试剂盒厂家

包被抗原

酶标二抗

敏感性

特异性

应用范围

IDEXX、广东悦洋

Erns蛋白或E2

Erns蛋白某个表位单抗

猪场抗体监测

中国兽医药品监察所

E2蛋白

抗猪IgG

略高

较高

猪场抗体监测

LSI、韩国安捷、韩国金诺

全病毒

E2Erns某个表位单抗

阴性猪筛选

关于如何选择猪瘟ELISA抗体检测试剂盒:根据目的不同选择不同的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒,在针对疫苗接种后效果评估上,建议选择IDEXX、广东悦洋和中国兽医样品监察所猪瘟ELISA抗体检测试剂盒,如果我们用于筛选阴性猪,或在未来猪瘟净化时,建议选择LSI、韩国金诺、韩国安捷猪瘟ELISA抗体检测试剂盒。

此外,在不同实验室出的猪瘟ELISA抗体检测报告中,我们一定要注明所使用的试剂盒厂家,这样才便于识别猪场猪瘟抗体水平情况。同时,ELISA方法相对于中和抗体法来说,ELISA方法仅是定性,中和抗体方法为定量方法,建议有条件的猪场采用中和抗体检测方法来评价猪瘟疫苗免疫效果。


公司地址:成都东部新区石盘街道檬子路6号

联系电话:028-27282488 销售电话:028-27400432 邮箱:hpswjt@163.com

华派移动官网

微信扫一扫,关注华派

Copyright?2019 华派生物技术(集团)股份有限公司 版权所有 蜀ICP备:蜀ICP备12000364号-1 网站技术支持:明腾网络