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不同白油乳化鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感四联灭活疫苗免疫效果的比较

来源:文|王萧发布时间:2020-01-15 点击率:2432

摘要:本试验分别用A:车间白油、B:130白油、C:150白油、D:KF-50白油、E:71VG等五种不同白油乳化配制成新支减流四联灭活疫苗,做粘度、稳定性测定、安全检验和效力检验。结果,五组灭活疫苗的粘度和稳定性均符合药典标准。在安全检验试验中,五组试验动物均健活,无局部和全身不良反应。对安全检验试验动物进行剖检发现,经颈部接种的试验动物中,车间白(购自美孚公司)油组吸收效果最好,均一性最强;经胸部接种的试验动物中,71VG组吸收效果最好,28天后基本吸收完全。在效力检验试验中,130组疫苗接种后效果最好,抗体水平最高,免后28天新城疫抗体效价分别能达到28.1,较车间白油组疫苗高2个滴度以上;减蛋综合症抗体效价分别能达到29.8和28.9,H9亚型禽流感抗体分别为29和28.6。

关键词:灭活疫苗佐剂;抗体水平

油乳剂灭活疫苗作为兽用生物制品中常用的一类产品,目前已得到国内外大力推广。白油作为常用的灭活疫苗佐剂能够增强机体对抗原的免疫应答,有效提高机体免疫力。据有关资料显示,白油的品质直接关系到疫苗的效果。以品质优良的白油作为灭活疫苗佐剂来生产疫苗能够达到所生产的疫苗质量稳定、安全、高效的目的。从而使免疫动物产生较高的抗体水平,维持稳定,高效的保护期。本试验通过采用不同白油作为疫苗佐剂乳化配苗,并通过动物试验来比较不同白油所生产的疫苗的安全性、吸收情况以及使动物产生抗体的水平。并由此,为实践生产中灭活疫苗佐剂的选择提供有效的科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 抗原:配苗用NDV、AIV、IBV、EDSV抗原:由本公司一车间提供。

1.1.2 疫苗佐剂:A:车间白油;B:130白油;C:150白油;D:KF-50白油;E: 71VG

1.1.3 吐温-80、司本-80:由本公司一车间提供。

1.1.4 血清:鸡新城疫阳性血清:购自中国兽医药品监察所(批号:S121407);减蛋综合征阳性血清:购自中国兽医药品监察所(批号:201211);禽流感(H9亚型)阳性血清:本实验室制备(批号:20151019);SPF鸡阴性血清:本实验室制备(批号:20151012)。

1.1.5 HI抗原:鸡新城HI抗原: 本实验室制备(批号20160105);减蛋综合征HI抗原: 本实验室制备(批号20160114);禽流感(H9亚型)HI抗原: 本实验室制备(批号20160111)。

1.1.6 主要器材:实验室高剪切分散乳化机:购自上海法孚莱能源技术有限公

司(型号Type);TG-16台式高速离心机:购自四川蜀科仪器有限公司;NDJ-8S数字式粘度:购自上海尼润智能科技有限公司。

1.1.7 试验动物:7-14日龄雏鸡:购自山东济南斯派福瑞。

1.2 方法

1.2.1 疫苗配制  

1.2.1.1 油相制备:将4种白油分别同司本-80以94:6比例配制,混合均匀后于121℃高压灭菌30分钟,71VG可直接使用。

1.2.1.2 水相制备:NDV、AIV、IBV、EDSV等抗原和PBS以1:1:1:1:3比例混合后,按96:4比例加入吐温-80,并混合均匀。

1.2.1.3 乳化配苗:在烧杯中加入油相,以7:3比例,向油相中缓慢加入水相,3400r/min,乳化3分钟,搅拌均匀。然后以6800r/min,乳化11分钟,完成乳化进行分装。

1.2.2 性状检验:根据2015版《中国兽药典》质量标准对成品的粘度和稳定性进行测定。

1.2.3 安全及吸收性试验

1.2.3.1 颈部皮下注射:疫苗分别经颈部皮下注射8日龄雏鸡,0.6ml/只,每组12只。接种后14、21、28天,对接种鸡进行剖检,每次剖4只,观察吸收情况。

1.2.3.2 胸部肌肉注射:疫苗分别经胸部肌肉注射14日龄雏鸡,1ml/只,每组12只。接种后14、21、28天,对接种鸡进行剖检,每次剖4只,观察吸收情况。

1.2.4 效力检验:疫苗分别经肌肉注射14日龄雏鸡,0.3ml/只,每组10只。分别于免后0、14、21、28、35、49天采血,分离血清进行抗体效价测定。

2 结果

2.1 性状检测结果(表1)

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五组灭活疫苗之中130和150两种白油乳化的B组和C组疫苗粘度明显低于其他几组,分别为16.9cP和19.6cP;五组灭活疫苗性质稳定,在3000r/min,15min和5000r/min,30min两种条件下离心均无析出水相。

2.2 安全检验及吸收情况检测

2.2.1 颈部皮下注射吸收情况(表2,图1)(评分见表3)

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图1 颈部皮下注射吸收评分参考实图.jpg

图1 颈部皮下注射吸收评分参考实图

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整体看,A组吸收效果最好,均一性强,21天后基本吸收完全,仅见点状物质存在。各免疫组精神状态良好,饮食正常,剖检观察接种鸡胸腺正常。

2.2.2 肌肉注射吸收情况(表4,图2)(评分见表5)

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图2 胸部肌肉注射吸收评分参考实图.jpg

图2胸部肌肉注射吸收评分参考实图

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整体看,E组吸收效果最好,28天后基本吸收完全,仅见点状物质存在。各免疫组精神状态良好,饮食正常。

2.3 效力检验结果

2.3.1 免疫SPF鸡ND抗体检测结果(图3)

图3.png

图3 ND抗体效价变化

五组灭活疫苗接种的动物ND抗体效价在免后7-14天内有下降的趋势,在14天以后开始回升。其中B组疫苗(130白油)接种后效果最好,抗体效价最高能达到28.1,保护时间最长,到免后49天仍然能达到28以上。

2.3.2 免疫SPF鸡EDS抗体检测结果(图4)

图4.png

图4 EDS抗体效价变化

五组灭活疫苗接种的动物EDS抗体效价在免后7天即出现上升趋势,到第21天基本达到最高。其中B组疫苗(130白油)接种后效果最好,抗体效价最高,能达到29.8以上。

2.3.3 免疫SPF鸡AI(H9亚型)抗体检测结果(图5)

图5.png

图5 AI(H9亚型)抗体效价变化

五组灭活疫苗接种的动物AI抗体水品在免后7-14天内有下降的趋势在14天以后开始回升。其中B组疫苗(130白油)接种后效果最好,抗体水平在第42天达到最高,为210.1。

3 结论

疫苗佐剂是指与抗原同时或预先使用,能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫反应类型的一类物质。常见的疫苗佐剂有铝盐佐剂和油佐剂,但铝盐佐剂在与高纯度的小分子蛋白抗原共同使用时不能引起足够的抗体应答。而油佐剂在抗体效价和免疫持久性方面都优于铝盐佐剂,因此油佐剂更广泛的作为疫苗佐剂来使用。油佐剂也有很多不同种类,在选择油佐剂的时候,不仅要考虑该佐剂对动物免疫的促进作用,同时也要考虑其安全性、毒副作用和稳定性是否达到要求。

本试验中采用车间白油、130白油、150白油、KF-50白油、71VG等五种油佐剂制成的五组新支减流四联灭活疫苗,其粘度均在32.8-69.9cP之间,均符合兽药典标准。其中,KF-50白油D组灭活疫苗的粘度最高,而使用130白油制备的灭活疫苗年度最低。同时,五组灭活疫苗的稳定性均符合兽药典要求,在3000r/min,15min和5000r/min,30min两种条件下离心均无析出。五组疫苗中,颈部皮下接种部位A组疫苗(车间白油)吸收效果最好,均一性强,21天后疫苗基本吸收完全,仅见点状物质存在,各免疫组精神状态良好,饮食正常,剖检观察接种鸡胸腺正常;胸部肌肉接种部位E组疫苗(71VG)吸收效果最好,28天后疫苗基本吸收完全,仅见点状物质存在。各免疫组精神状态良好,饮食正常。

在免疫效价监测方面,B组疫苗(130白油)接种后效果最好,抗体水平最高,免后28天时新城疫抗体效价分别能达到8.1log2,较A组疫苗(车间白油)高2个滴度以上;减蛋综合症抗体效价分别能达到9.8log2(最高),H9亚型禽流感抗体分别为9.0log2,较A组疫苗(车间白油)高2个滴度以上。

疫苗佐剂的选择应从安全性、稳定性、有效性等多个方面着手考虑。随着兽用疫苗的发展,很多新型疫苗逐渐兴起。对于如何更加安全有效地促进动物机体对抗原的免疫应答,疫苗佐剂的选择显得尤为重要。兽用疫苗佐剂的研究随着对免疫机理的不断认识,将开发出更多安全有效的免疫佐剂。

参考文献

(略)

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