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猪流行性腹泻防控中后备母猪的免疫驯化措施

来源:李金海发布时间:2022-05-17 点击率:756

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,以呕吐、水样腹泻和严重脱水为特征。各种年龄阶段的猪都可感染发病。日龄越小,危害越大,产房仔猪特别是7日龄以内的小猪,发病率和死淘率可达100%。据国内多个权威实验室和华派生物诊断中心的检测数据显示,近3年来猪场病毒性腹泻,特别是猪流行性腹泻的发生率明显反弹。尽管非洲猪瘟传入中国以来,规模场的生物安全设施、设备不断升级,生物安全意识和生物安全管理水平不断提高,但非瘟后清场复产,新建猪场投产,以及用二元母猪更替三元、四元母猪,都需要大量引种,有些猪场为了赶生产进度,多来源引种,没有对后备母猪进行有效驯化和免疫,当PEDV进入猪场后,常常导致仔猪爆发PED,给猪场造成巨大损失。

PED防控关键在于提高猪群整体特异性免疫力和降低猪场环境特别是产房的病毒载量,两者缺一不可。生产实践中发生PED主要从青年母猪开始,其所产仔猪发病率和死亡率也最高。因此,做好青年母猪的免疫预防,特别是后备母猪的免疫驯化是猪场PED防控的关键环节。


1 PED的免疫保护机制

PEDV对产房仔猪的危害最大,由于感染发病日龄小,而疫苗主动免疫后需要一段时间才能建立免疫保护,因此,只能加强母猪免疫,提高母源抗体水平,小猪通过吃母乳得到被动保护。猪乳汁中的免疫球蛋白主要是IgA、IgG、IgM这3种,TGEV和PEDV抗病免疫力以黏膜免疫为主,肠道免疫所产生的分泌型IgA (sIgA)成分对于新生仔猪防控TGEV、PEDV 侵染至关重要。sIgA 的产生及轴系的运转机理称为“肠道-乳腺-sIgA 轴”。

肠道-乳腺-sIgA 轴的本质是指病原微生物侵染肠上皮细胞导致肠系膜淋巴结内产生了能够合成sIgA 的淋巴浆母细胞,这些淋巴浆母细胞可回到肠道固有层,也可以转移至乳腺而发挥作用。被免疫激活的母猪乳腺上皮基底层的淋巴细胞可持续分泌 sIgA,且不容易被乳汁和肠道中的酶类降解,使低日龄仔猪免遭PEDV侵袭

肠道-乳腺-sIgA 轴机制的关键是相关淋巴细胞的激活、抗体分泌细胞 (ASCs) 分化成熟以及ASCs 归巢至乳腺上皮固有层。口服的PEDV病毒一旦和肠粘膜有效接触,则被肠皱襞M 细胞 (Microfold cells) 或树突细胞通过模式识别受体 (Pattern recognition receptor,PPR) 摄取,后经过加工处理转运至肠道派氏结。而通过肌肉注射或后海穴注射的弱毒疫苗,在体内有一过性的增殖过程,通过血液循环或淋巴循环到达肠道派氏结。在肠道派氏结抗原与B 细胞相互作用或通过特异T细胞受体(TCR)与T细胞相互作用 ,使这些淋巴细胞活化。活化的 B 细胞增殖分化成为潜在分泌抗体的浆母细胞 (Plasmablast),并进一步成熟为抗体分泌细胞 (ASCs)。淋巴细胞能够依赖归巢分子 (或转运分子) 系统的作用回到肠道或进入乳腺组织并定植。致敏的淋巴浆母细胞在乳腺局部分泌二聚体sIgA,主要存在于乳汁中。


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通常针对PEDV特异性抗体IgA,其不同免疫刺激途径所产生的IgA抗体滴度不同,通过口服PED活疫苗,所产生的IgA滴度比肌肉注射或后海穴注射产生IgA水平更高。灭活疫苗免疫后只能产生体液免疫,通常不足以引起局部黏膜免疫反应,但大量的实践表明用强毒或者弱毒疫苗激活猪的免疫系统后,再用灭活疫苗强化,免疫保护效果相对更好。

根据PED的免疫保护机制,要想使一胎母猪的抗体水平更高,后备母猪入群之前要做好免疫驯化工作,可以用活疫苗肌肉注射或后海穴注射,也可以用强毒返饲材料口服,从而激活猪的肠道免疫系统,入群后种猪群也要做好相应的跟胎免疫。


2 用病毒性腹泻疫苗进行后备母猪的免疫驯化

当前市场上有多个厂家生产变异毒株的PEDV弱毒疫苗,为了猪场生物安全,在非瘟条件下,尽量选用弱毒疫苗进行免疫驯化。由于弱毒疫苗对胃酸的抵抗力降低,弱毒疫苗建议采用肌肉注射或后海穴注射,并且免疫频次要够。对于规模比较大的阳性场,强烈建议后备母猪入群前免疫3次,2次活苗+1次灭活疫苗;如果免疫驯化时间不够,也可采用活苗疫苗+灭活苗同时免疫2次的方式。

华派生物生产的胃腹流康(猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗),为变异毒株疫苗,PEDV与流行株的同源性在98%以上;采用悬浮培养工艺,抗原含量高,配备国家专利稀释液,抗体水平更高,持续时间更长其抗体水平与“活疫苗+灭活疫苗”联合使用的抗体水相当


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3 后备母猪PEDV病料返饲驯化

非瘟传进我国之前,部分猪场用病料返饲驯化后备母猪,取得了很好的防控效果。非瘟后用病料返饲风险比较高,必须要有准确的实验室检测作为支持,部分感染压力非常大的场,在确保无非瘟、蓝耳病和伪狂犬野毒的情况下,也可以用病料返饲驯化后备母猪。

3.1 病料返饲驯化的条件

由于驯化过程中存在极大散毒的风险,猪场应优选商品疫苗进行免疫驯化。如果猪场PEDV感染压力大,又有相应的场地条件和实验室检测支撑条件,可以进行强毒返饲驯化。

选择独立的后备猪隔离驯化场,防止驯化期间病毒传播感染生产母猪群。我国猪场设计差异较大,猪场隔离舍距离母猪场有较远距离,新引种的后备猪可以直接在隔离舍隔离返词对于距离较近的猪场,建议外租场进行隔离返饲

3.2 返饲前的准备工作

3.2.1 后备母猪的引进。根据猪场具体情况,计算出未来半年到1年的后备母猪数,一次性引进不同日龄后备母猪,避免半年内频繁引进后备母猪。

3.2.2 返饲病料的准备

正在发生腹泻的猪场通过实验室确诊为单纯PEDV感染的,收集腹泻仔猪的肠道做返词病料。没有腹泻的猪场,可在场外用原来保存的PEDV病料匀浆口腔灌服感染3d内的健康仔猪,感染PEDV的仔猪必须饲养在一个洁净保温环境,感染后24-36h,根据仔猪临床表现,进行剖杀取肠段。

因仔猪腹泻24h以内PEDV含量最高,所以最佳返饲病料建议取7日龄以内、出现明显腹泻或呕吐症状24 h以内的哺乳仔猪肠道。采集肠道病料时,每头仔猪需要分别收集肠道。同时,收集部分肺脏、脾脏病料,每窝仔猪(约10头仔猪)肺脏、脾脏放到一个包装袋,并进行合样检测,检测项目包括ASFV、CSFV、PRV和PRRSV,若有ASFV、PRV等病原阳性的情况,不得返饲。采集到的多余病料按照5头仔猪肠道/包冷冻保存,用于逐批驯化后备猪。返病料需使用专门的冰箱盛放,避免与疫苗、药品交叉,冰箱放隔离舍专人管理,预防冰箱断电而造成病料失效。

将检测合格的返饲肠段剪碎,加入适量预冷的生理盐水(通常1:10),用匀浆机打碎(可加入适量抗生素),取1mL送实验室进行荧光PCR检侧,PEDV的Ct值应20,返饲的量根据后备母猪日龄的大小和Ct值的高低确定。过多和过量返饲会导致母猪免疫耐受。

3.2.3 返饲操作人员的培训

对参与返饲的人员进行返饲操作技术要领和注意事项等方面的培训。

3.3 返饲操作

返饲前,后备母猪停水停料4h以上。如果是限位栏可以将返饲病料倒在饲料的表面。如果是大栏饲养,可将返饲肠道匀浆和饲料一起调成粥状料,提前准备料槽,保证每头猪都可以同时吃到饲料。也有一些规模猪场将返饲病料匀浆液注射到小面包中,给后备母猪投喂。通常对后备母猪返饲2次,每天1次。返饲时要对没有吃的后备母猪做好标记,绑定后再灌服返饲病料。返饲当天母猪饲料中不要添加抗病毒药物,饮水中不要加入消毒剂和酸化剂。

3.4 评估返饲效果

返饲后,记录出现腹泻、呕吐、厌食、不食等临床症状的后备母猪,并计算比例,评估返词效果。后备母猪群处理临床症状的比例与猪群历史感染情况、返饲日龄有关,一般后备母猪群出现临床症状的比例可达70%以上。

3.5 隔离饲养与环境消毒

后备母猪隔离场的人员、物品及车辆等都要与本场完全分开。返饲后10天,对圈舍冲洗消毒,可连续3天带猪消毒,降低环境当中的病原浓度。

3.6 返饲后的疫苗免疫程序

返饲成功后2-4周(根据返饲日龄确定),用灭活疫苗或自家苗再加强免疫一次。

 

4 用PEDV活病毒液驯化

在非瘟条件下,为了降低非瘟和其他烈性传染病的影响,有条件的猪场也可以用活病毒液进行驯化。用于后备母猪驯化的活病毒液以本场分离株最好,或者以同源性99%以上,免疫原性好的毒株作为驯化材料。驯化用活病毒的代次要低;免疫原性要好;病毒含量要达到要求,用qPCR检测,PEDV的Ct值≤20;要确保没有ASFV、PRRSV、PRV等外源病毒和支原体的污染。用活病毒液对后备母猪进行驯化,其操作步骤和相关技术要领与用PEDV病料返饲驯化相似。

 

5 后备猪入场、入群前的监测和管理

后备猪入场前除了非洲猪瘟抗原和非洲猪瘟抗体的检测外,应该重视PEDV抗原的检测。可以采集后备母猪粪便进行荧光RT-PCR检测;采集血清样品测IgG、IgA或中和抗体水平。根据PEDV抗体水平和是否携带PEDV抗原决定入场、入群时间。通常用强毒材料驯化,隔离时间需要6周的时间,猪群停止排毒方可混群。

 

6 后备母猪入群后的疫苗免疫

后备母猪入群后,还应进行跟胎免疫,产前35天、产前15天,分别免疫一次。如果后备培养期间免疫频次不够,建议怀孕60天、80天、 100天免疫接种3次:活疫苗+活疫苗+灭活疫苗,或者用“活疫苗+专利稀释液”。

 

总之,PED对猪场的生产成绩影响很大,对PED的防控必须采取综合防控方案,其中,后备母猪的免疫驯化是PED防控最为重要的环节,猪场可根据实际情况选择免疫驯化的方式。

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